骨（gǔ）髓穿刺抽吸（xī）技術  

骨（gǔ）髓穿刺抽吸技術的早期發展主要（yào）集中（zhōng）在人類（lèi）醫學領域，隨後（hòu）逐漸應用（yòng）於動物研究。最初的技（jì）術較為簡單，主要用於獲取骨（gǔ）髓樣本以進行血液學和病理學分析。隨著研究需求的增加，骨髓（suǐ）穿刺抽吸的技（jì）術逐漸得到了改進和優化，設備改進方麵引入了專用的骨髓穿刺針，這些（xiē）穿刺針具備更好的設計可以減少組織損傷和提（tí）高樣本質量，以及在操作過程中引入嚴（yán）格的無菌技術以減少感染的風險。

骨髓穿刺技術不僅在醫學研究中得到廣泛應用還擴展到多個領域。藥物研發，評估新藥對骨髓的影響，尤其是抗癌藥和免疫抑製藥物的研（yán）究中（zhōng）；毒理學研究中，同樣需要研究有毒物（wù）質對骨髓的影響；此（cǐ）外（wài），基因（yīn）治療，通過獲取骨髓細胞進行基因組（zǔ）研究和基因編（biān）輯實驗（yàn）等都需要進行骨髓穿刺。本文將介紹實驗犬的骨髓穿刺抽吸技（jì）術。

采集部位（wèi）

對（duì）於犬，骨髓（suǐ）樣本（běn）通常從股骨轉子窩、肱（gōng）骨近端（duān）或髂骨翼采集，其他部位包括（kuò）胸骨、肋骨。如果骨盆和股骨（gǔ）區域含有豐富的脂肪組織，采集（jí）則會變（biàn）得更具挑戰性。下文（wén）主要講述犬肱骨近端骨髓采集（jí）的操（cāo）作程序。

肱骨近端骨（gǔ）髓采集

材（cái）料和設備

○ 無菌手套

○ 電動剪毛器和（hé）清潔溶液

○ 局部麻醉藥（如（rú）利（lì）多卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培（péi）養皿

○ 玻璃顯微鏡載玻片（piàn）

○ 顯微血細胞比（bǐ）容毛細（xì）血管（圖A），有毛細血管球

○ 11號手術刀（dāo）片

○ 無菌紗布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G帶針芯的骨髓針（圖B和C）

A：骨髓穿刺所需的材料和設備

B：帶蓋和（hé）針芯的穿刺針

C：已移除（chú）蓋和針芯的穿刺針（zhēn）

操作步驟

1、在進行深度鎮靜或全身麻醉後，動物側臥位，修剪采集部位的毛發，可以在采集部（bù）位皮（pí）下注射局部麻醉劑（如利多（duō）卡因、布比卡（kǎ）因），采集部位無菌清洗。如圖1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發已剔除。

2、打開並佩戴（dài）無菌手（shǒu）套。助理輔助將穿刺針、注射器和手術刀片打開並（bìng）放入無（wú）菌區域，或將這些物品以無菌的方式遞給術者。使用10或12ml的注（zhù）射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖1B：從培養皿中抽取EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌區域內。移（yí）除（chú）穿刺針的蓋（gài）子和針芯，通過順時針旋轉（zhuǎn）確保針頭的防護裝置牢固地連（lián）接在針（zhēn）頭的基部。將含有EDTA的注射器連接到針頭的頂部並旋緊。通過將EDTA噴回培養皿來灌注針頭，留下約0.5 mL的EDTA在（zài）注射器中。灌注（zhù）時保持在培養皿上方，不要讓無菌針頭的（de）尖（jiān）端接觸培（péi）養皿，然（rán）後（hòu）將注射器從針（zhēn）頭上移除，置於無菌區域內。重新裝上針芯和蓋子。注：在大型犬中，可以移除（chú）針頭防護（hù）裝置，以方便進入（rù）髓腔。如圖1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺針

4、觸摸並確定（dìng）肱骨近端外側的平坦區域，位（wèi）於大結節的遠端。確定肩（jiān）胛（jiǎ）骨和肱骨之間的肩關節（jiē），以確保不會（huì）誤采到該區域。在平坦區（qū）域正上方的皮（pí）膚上切開一個小口。如（rú）圖1D。

圖1D：在肱骨近端外側的（de）平坦區域切開一個小口

5、牽拉皮膚，將針頭“彈（dàn）入（rù）”切口，確保針（zhēn）頭已穿透深層皮下組織。重新確認肱（gōng）骨近端外側的平坦區域（yù），位於大結（jié）節的遠端。將針尖直接放在骨頭上，垂直（zhí）於平麵。以順時（shí）針和逆時針旋轉（zhuǎn）的方式適度施加壓力，直（zhí）至針（zhēn）頭穿透近端骨皮質。穿透皮（pí）質後，減小角度，使針頭朝向肘部，平行於髓腔。繼續（xù）扭轉，直到針完全（quán）嵌入骨內。如圖1E。

圖1E：穿刺針彈（dàn）入切口

6、移除蓋子和針芯，並迅速連接含有EDTA的（de）注射器（qì）。抽吸至可見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排出到培養皿。如圖1F。

圖1F：將骨髓吸（xī）入裝有EDTA的注射（shè）器

7、骨髓包含在白色的針狀物中，表明穿刺成功。使用毛細管或帶有毛細管球或移液（yè）管（guǎn）球的巴斯德（dé）移液管取出並排出這（zhè）些顆粒，用於血塗片（piàn）製備。每片至少需要1個（gè）針狀物（wù）；然而，建（jiàn）議每張（zhāng）載玻片至少有3 ~ 5個（gè）較大的針狀物，以進行充（chōng）分評估（gū）。任何剩（shèng）餘的骨髓內容（róng）物都可以收集到EDTA管中，並與載玻片一起送往實驗室。如圖1G。

圖1G：使用巴斯德（dé）吸（xī）管取出顆粒以製備（bèi）血塗片

8、在動物恢複後給與鎮痛藥物，並根據需要繼續使用。

潛（qián）在的不良（liáng）反應、緩解措施或治療方法

1、采樣（yàng）部（bù）位感染，但這種情況很（hěn）少見

2、對軟組織如神經、肌肉和關節表麵的創傷（shāng）

3、采樣部位出血

4、術後疼（téng）痛（tòng）

緩（huǎn）解措（cuò）施

○ 密切注意無菌技術

○ 仔細（xì）辨別解剖標誌，準備骨骼/骨標本以正確（què）找到解剖標誌，避（bì）免對周圍組織造成意外（wài）創傷

○ 對采樣部位施加直接（jiē）壓力，髓內（nèi）出血不會引起大的問題，因為血液會迅速被吸收

○ 術後疼痛通常是短暫的，鎮痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥通常是足夠的，但如果需要也可以在術（shù）後使用

小結

為了提（tí）高（gāo）骨髓穿刺抽（chōu）吸的成功率（lǜ）和樣本質量，必須製定全麵的標準操作（zuò）程序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管理、穿刺操作及樣本處理等各個環節，並對實驗人員進行係統（tǒng）且廣泛的（de）培訓。此外，實驗研究（jiū）人員應持續（xù）優化和改進技術，精細化操作流程，提升效率與（yǔ）準確性，從而為生物醫學研（yán）究提供高質量（liàng）的樣本和可（kě）靠的數據支持。